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微生物菌種如何利用了凍干燥機進(jìn)行冷藏

發(fā)布日期:2022-07-18      瀏覽次數(shù):939

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江蘇天翎儀器凍干技術(shù)水平日益提高,企業(yè)也在賦予凍干機新的動能,比如智能化、信息化等。當(dāng)然,凍干機行業(yè)也不忘規(guī)范化地發(fā)展。凍干機起源于19世紀(jì)20年代的真空冷凍干燥技術(shù),后真空凍干技術(shù)除了在醫(yī)藥上有著廣泛應(yīng)用,在生物制品、食品、血液制品、活性物質(zhì)領(lǐng)域之外的領(lǐng)域也發(fā)揮了重要作用。下面小編為大家介紹下微生物菌種的冷凍干燥保藏操作流程:
凍干機適用于大多數(shù)細(xì)菌、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母等的真空冷凍干燥保藏,但不適于霉菌的菌絲型、菇類、藻類和原蟲等。其操作流程如下:
1、安瓿管準(zhǔn)備
安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時,先用2%鹽酸浸泡過夜,自來水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后、貼上標(biāo)簽,標(biāo)上菌號及時間,加入脫脂棉塞后,121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。
2、保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備
保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時,應(yīng)注意其濃度及pH值,以及滅菌方法。如血清,可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,每次10-30分鐘,備用。
3、凍干樣品的準(zhǔn)備
在適宜的培養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,進(jìn)行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術(shù)規(guī)程》(試行)),與保護(hù)劑混合均勻,分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細(xì)胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜(以大腸桿菌為例,為了取得每毫升1010個活細(xì)胞菌液2毫升-2.5毫升,只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采用較長的毛細(xì)滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,裝量為半個球部。若是液體培養(yǎng)的微生物,應(yīng)離心去除培養(yǎng)基,然后將培養(yǎng)物與保護(hù)劑混勻,再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短,在1-2小時內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍。分裝時應(yīng)注意在無菌條件下操作。
4、預(yù)凍
一般預(yù)凍2小時以上,溫度達(dá)到-20℃到-35℃左右。
5、冷凍干燥
采用凍干機進(jìn)行冷凍干燥。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內(nèi),開始冷凍干燥,時間一般為8-20小時。
終止干燥時間應(yīng)根據(jù)下列情況判斷:
安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀;
真空度接近空載時的zui高值;
樣品溫度與管外溫度接近;
選用1-2支對照管,其水份與菌懸液同量,視為干燥完結(jié);
選用一個安瓿管,裝1-2%氯化鈷,如變深蘭色,可視為干燥完結(jié);
冷凍干燥完畢后,取出樣品安瓿管置于干燥器內(nèi),備用。
6、真空封口及真空檢驗
將安瓿管頸部用強火焰拉細(xì),然后采用真空泵抽真空,在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。
7、保藏
安瓿管應(yīng)低溫避光保藏。
8、質(zhì)量檢查
冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進(jìn)行各項指標(biāo)檢查,如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。新版GMP附錄1第三章第十一條規(guī)定應(yīng)當(dāng)對各個潔凈級別的微生物進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測,以評估無菌生產(chǎn)的微生物狀況。其中監(jiān)測方法包含沉降菌法、定量空氣浮游菌采樣法和表面取樣法等。與此同時,新版GMP更強調(diào)在關(guān)鍵操作的全過程均應(yīng)該對*潔凈區(qū)進(jìn)行懸浮粒子和微生物監(jiān)測。使灌裝與凍干區(qū)域相連接的半自動進(jìn)出料裝載機構(gòu)以L型布局形式出現(xiàn),與以往的老式凍干機的大開門式相比較,因良好的隔離操作,環(huán)境控制更趨向于理性的數(shù)據(jù)控制,且無菌控制的可信度大大增加,L型布局的合理設(shè)計使*區(qū)域更集中,在環(huán)境監(jiān)測時,監(jiān)測點也更容易把握,便于實施。

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